Правила постановки иммуногистохимических реакций ручным методом

обработка микроволнами, без использования химических растворителей

промывка препаратов в ацетоне и растворе щелочи

промывка препаратов в ксилоле и спирте последовательно

промывка препаратов в растворе соли и протеолитическом ферменте

антитела вносятся одновременно

антитела вносятся последовательно с интервалом в 15 мин

сначала вторичные антитела

сначала первичные антитела

использование не работающих антител

использование неподходящей системы визуализации

недостаточное время инкубации с первичными или вторичными антителами

некорректное хранение исследуемых образцов

1-2 часа в термостате при температуре 60° или ночь при 37°

30 мин в термостате при температуре 60° в горизонтальном положении

4 часа в термостате при температуре 60°

ночью в термостате при температуре 60°

в ходе обработки ткани изопропиловым спиртом

в ходе обработки ткани формалином

при заливке ткани в парафин

при холодовой ишемии

высыхание среза во время окрашивания

нарушение очередности этапов окрашивания

несовместимость буфера для демаскировки или субстрат-хромогена

несовместимость первичных и вторичных антител

использование старых растворов

короткое время инкубации с антителами

неправильное хранение антител

несовместимость буфера для демаскировки или субстрат-хромогена

нарушена очередность этапов окрашивания

не подавлена активность эндогенной пероксидазы

недостаточная концентрация антител в реакции

несовместимость буфера для демаскировки или субстрат-хромогена

для доокрашивания клеток

для маркирования стекол

для создания гидрофобного барьера вокруг среза

для фиксации биологических образцов

для блокирования света при инкубации с антителами

для поддержания постоянной влажности срезов при инкубации с антителами

для ускорения реакции антител с антигенами

для восстановления эпитопов антигена, скрытых или модифицированных в результате фиксации

для инактивации нежелательных антигенов

для увеличения специфичности антитела к антигену

для уменьшения времени инкубации антител с антигеном

промывочный буфер

трис-ЭДТА буфер

трис-буферный раствор с Твином

цитратный буфер

за 60 мин до начала исследования

можно использовать недельной давности

непосредственно перед закапыванием

следует приобретать готовый

антиген-антитело

антигена с ферментативной меткой

антитела с формалином

вторичного антитела с хромогеном

адгезив на основе желатина

адгезивы на основе белков

клей ПВА

полилизин

0,5-10 мкл

100-1000 мкл

1000-5000 мкл

20-200 мкл

воздействие ультразвуком

обработка в высокотемпературном буфере

обработка ферментами

протеолитическая обработка

изменение внешнего вида лабораторных помещений

контроль истечения срока годности каждого реагента

регулярное обслуживание оборудования

участие лаборатории в раундах по различным нозологиям и эпитопам в центрах контроля качества

3,3'-диаминобензидин (DAB)

алкалофосфатаза

нитротетразолиум-блу тетразолиевой соли (NBT)

флуоресцеин-изотиоцианат (FITC)

к недостаточному окрашиванию

к перекрестным реакциям

к слетанию срезов

к фоновому окрашиванию

на этапе блокировки эндогенной пероксидазы

на этапе визуализации

на этапе внесения вторичных антител

на этапе депарафинизации

2-4 микрон

4-5 микрон

5-6 микрон

менее 0,5 микрон

в одностадийной используются только вторичные антитела с фермантативной меткой, а в двухстадийной добавляется линкерный раствор, обеспечивающий наилучшее выявление

одностадийная система использует только первичные антитела, в то время как двухстадийная система использует первичные и вторичные антитела

одностадийная система основана на обнаружении антигена с помощью химических реакций, а двухстадийная система основана на обнаружении антигена с помощью флуоресценции

одностадийная система предполагает только депарафинизацию, а двухстадийная система включает депарафинизацию и демаскировку антигена

использованием старых растворов

нарушением продолжительности инкубации от постановки к постановке

неправильным разведением антител

определением влажности в помещении лаборатории

гематоксилин и щелочной раствор

гематоксилин и эозин

метиленовый синий и щелочной раствор

не требуется

использование плохо фиксированных или нефиксированных тканей

нарушена очередность этапов окрашивания

несовместимость первичных и вторичных антител

очень короткое время инкубации, либо низкая концентрация разведеных антител

использование стекол с адгезивом на основе белков

использование стекол с истекшим сроком годности

сушка стекол в вертикальном положении

аффинности антител к антигену и концентрации антител в растворе

величины молекул антигена

концентрации водорода в блокирующем растворе

температуры хранения антител

перекисью водорода

раствором ацетона и глицерола

раствором щелочи

фосфатно-солевым раствором (PBS) с альбумином

буферные растворы на основе солей

дисстилированную воду

дисстилированную воду с добавлением мыла

раствор из изопропанола и дистиллированной воды